A traditional medicine, respiratory detox shot (RDS), inhibits the infection of SARS-CoV, SARS-CoV-2, and the influenza A virus in vitro
Brian Hetrick1, Dongyang Yu2, Adeyemi A. Olanrewaju1, Linda D. Chilin1, Sijia He1, Deemah Dabbagh1,Ghaliah Alluhaibi1, Yuan - Chun Ma3, Lewis A. Hofmann4, Ramin M. Hakami1 and Yuntao Wu1*
▋概述
背景：以外自始蔓延全球的新型冠状HIV病 (SARS-CoV-2) 已在 220 多个各地区和周边地区大风行，截至 2021 年 4 同年已导致少于 1.28 亿人染病，少于 280 都来丧生。当前，尚不可有效率增高 COVID-19 丧命率的放射治疗原理。我们数据分析了一种习惯的中会药口服制剂——融肺毒口服液 (RDS) 的潜在抑制冠状HIV已逝持续性，该口服液主要气态为新同年临床习惯中会用于放射治疗肺部哮喘的中会泡茶。
结果：RDS 消除 SARS-CoV 比较慢HIV、SARS-CoV-2 比较慢HIV、混合乙型HIV-SARS-CoV-2(Ha-CoV-2) 假型HIV以及传染持续性 SARS-CoV-2 和派生的 Ha-CoV-2 变种HIV (B.1.1.7、B.1.351、P.1、B.1.429、B.1.2、B.1.494、B.1.1.207、B.1.258 和 B.1.1.298) 对靶抑制原质的染病。我们必要持续性归功于 RDS 可以必要灭已逝 SARS-CoV-2 HIV微粒的传染持续性。此外，我们发掘出 RDS 还可阻碍乙型肺炎HIV对靶抑制原质的染病。
论据：RDS 可普遍消除细菌感染HIV染病。关键字：SARS-CoV-2，COVID-19，冠状HIV，抑制HIV放射治疗，融肺毒口服液，习惯中会药，SARS-CoV，乙型肺炎，Ha-CoV-2，SARS-CoV-2 假型HIV
▋背景
以外自始蔓延全球的新型冠状HIV病 (SARS-CoV-2) 已在 220 多个各地区和周边地区大风行，截至 2021 年 4 同年已导致少于 1.28 亿人染病，少于 280 都来丧生。当前，尚不可有效率增高 COVID-19 丧命率的放射治疗原理。新出现的 COVID-19 HIV病原体为冠状HIV SARS-CoV-2[1]，是 SARS-CoV 在相当严重急持续性呼吸综合征方面冠状HIV大类中会的姊妹HIV[2,3]。SARS-CoV 和 SARS-CoV-2 起初都是在中会国发掘出的；SARS-CoV HIV于 2002 年 11 同年在广东省首次被发掘出[4-6]，SARS-CoV-2 则于 2019 年 12 同年在武汉首次被发掘出[1,7,8]。在中会国，这两次由冠状HIV造成了的疫情中会，中会药以外被普遍用作，用以紧急应对冠状HIV造成了的哮喘。对于当前的 COVID-19 大风行，中会国有少于 85% 的 SARS-CoV-2 染病患者接受了习惯中会医药治疗法（9，10）。许多用作的中会药是否不具有效率的抑制冠状HIV特持续性并在诊疗上是否有效率，这个重要问题尚未得不到确实答复。
中会药作为放射治疗冠状HIV所招致哮喘的有效率治疗法，但由于缺乏体内或排泄的系统数据分析，其发展与合理用作以外受到了阻碍。为了确认中会药的潜在抑制 SARS-CoV-2 已逝持续性，我们从常用中会药中会比对了多种泡茶提取物，并从中会药口服液 RDS(英美两国一种金融业的食品补充剂) 中会发掘出了抑制 SARS-CoV 和抑制 SARS-CoV-2 HIV的已逝持续性，一种在英美两国的金融业的食品补充剂。RDS 用于増强人体肺脏的总体健康，其还除此以外多种泡茶气态，如人参和荆芥，它们是习惯上用于操纵炎症和肺部哮喘的中会泡茶 (11-13)。在此，我们报导 RDS 对 SARS-CoV、SARS-CoV-2 假HIV以及不具染病持续性的野生型 SARS-CoV-2 HIV对靶抑制原质的染病不具消除作用。我们必要持续性证明 RDS 可通过必要灭已逝HIV微粒或制止HIV渗透而消除HIV的后期染病开发进度。此外，我们发掘出 RDS 还可以制止的大流HIV对靶抑制原质的染病。这些得出结论，RDS 对细菌感染HIV的染病可能会不具普遍的消除作用。
▋结果
为了从习惯中会泡茶中会找到潜在的抑制 SARS-CoV-2 已逝持续性，我们从共约四十种习惯泡茶中会比对提取出 SARS-CoV-2S 抑制原假型比较慢HIV[14,15] 和人体肺部 A549(ACE2) 靶抑制原质，此有机体 ACE2 基因会通过比较慢HIV转导作为表征细胞内，从而稳定转导来实现超表达出来。比较慢假型HIV用作粉红色荧光抑制原 (GFP) 或荧光伦酶 (Luc) 作为报导基因，并通过了不具广谱抑制HIV带入消除剂，以及科莫多尔 (Arbidol)[16]，和有机体抑制毒血清对抑制 SARS-CoV-2(绘出 1a、C) 的证明。我们并能成功监测到科莫多尔 (Arbidol) 和抑制毒血清对于 SARS-CoV-2 假型HIV的消除作用，这是我们在其他四十余种习惯泡茶提取物测试者中会没有发掘出的，除此以外其中会一些持久较高危险持续性的泡茶 (绘出 1a-C)。然而，鉴于比较慢持续性假型HIV仅能监测 SARS-CoV-2 HIV的渗透行为，我们不能排除这些泡茶提取物可能会有在带入后阶段并能消除 SARS-CoV-2 的可能会持续性。我们必要持续性从习惯药剂融肺毒口服液 (RDS) 中会比对出了可能会的抑制 SARS-CoV-2 已逝持续性，该产品内包涵九种泡茶气态——、生物碱、人参、荆芥、玄参、苦杏仁、蜂房、皂角、甘草，在中会国习惯上用于放射治疗肺部哮喘 (11-13)。
内包涵羟基蜂蜜硫、3，4-二邻蜂蜜酰基奎宁硫、羟基 3，4-二邻蜂蜜酰基奎宁硫、原儿茶硫、羟基绿原硫和木犀草伦；花朵中会还内包涵衍生物 A、B 和 10 种已知环烯醚异戊二烯衍生物[17]；该植物还内包涵皂吲哚吲哚 A 和 B，以及抑制炎症作用的衍生物 C[18,19]。生物碱衍生物衍生物中会内包涵木脂伦、松脂醛和生物碱衍生物[20]。人参中会内包涵被称作人参糖衍生物的甾体糖衍生物，是人参属植物十分相似的植物有机化合物[21,22]。细叶荆芥中会主要已逝持续性气态为四种单异戊二烯，(−)-草莓酮、(+)-普罗伊酮、(−)-柠檬烯和 (+)-草莓呋喃；这种植物还内包涵其他氧化物，如 1-辛烯-3-醛、3-辛酮、β-香草烯和β-石竹烯[23]。玄参内包涵少于 162 种氧化物，除此以外环烯醚异戊二烯和环烯醚异戊二烯衍生物、苯丙衍生物、有机硫、异戊二烯类、糖类、黄酮类、和糖衍生物[24]。苦杏仁中会内包涵紫杉、氰基氧化物和果胶多糖[25]。皂角刺中会内包涵糖衍生物和羽扇豆硫[26,27]，而甘草中会内包涵主要已逝持续性气态甘草硫[28]。为了必要持续性测试者 RDS 的抑制 SARS-CoV-2 已逝持续性，用各不相同酒精硫度的 RDS 管控程序 A549(ACE2) 抑制原质，然后让这些抑制原质在持久 RDS 的持续持续性接受 4-6 天内的染病。染病后，在不持久 RDS 的持续持续性培养出来抑制原质，然后在 48 和 72 天内的时候，通过流基本型抑制原质忍术对HIV染病的消除作用完成举例来说。为了操纵抑制原质危险持续性，用作钴丙啶 (PI) 对即将丧生和已丧生的抑制原质完成颜料，仅在已逝抑制原质群中会分析原理 GFP+抑制原质。如绘出 2 下图，我们辨别到 RDS 对 SARS-CoV-2(GFP) 假HIV不具口服持久消除作用。为了表明这些结果，我们用作内源持续性表达出来 ACE2 的 VeroE6 抑制原质重复使用了该染病测试者。
(见下页绘出)
ACE2 外部表达出来，制造持续性 SARS-CoV 和 SARS-CoV-2 HIV可对其完成染病，ACE2 通常用于冠状HIV的数据分析 (7)。考虑到在缺乏 ACE2 超表达出来 [15，29，30] 的持续持续性，假型HIV对 VeroE6 的染病持续性较低，我们还用作了荧光伦酶报导基因假型HIV，该HIV的报导基因表达出来由 HIV-1LTR 和 Tat 驱动，不具更高的报导基因持久持续性和信噪比。
绘出 2：RDS 消除 SARS-CoV-2(GFP) 假型HIV染病 A549(ACE2) 抑制原质。
A.A549(ACE2) 抑制原质用 RDS 整年酒精 30 分钟后，用 SARS-CoV-2(GFP) 假型HIV染病。将抑制原质洒去HIV和 RDS，并在不持久 RDS 的持续持续性完成培养出来。流基本型抑制原质仪监测HIV染病消除持续持续性。未染病的抑制原质和染病 SARS-CoV-2(GFP) 但予以 RDS 放射治疗的抑制原质作为对照。GFP+抑制原质倍数已看出。(PI) 钴丙啶。
B.RDS 的抑制原质危险持续性表征。A549(ACE2) 抑制原质用 RDS 整年酒精 4 天内，洒去 RDS，无 RDS 培养出来 48 天内。钴丙啶颜料鉴定自始在丧生抑制原质和已丧生抑制原质，流基本型抑制原质忍术分析原理。素描口服-自由基抑制原质危险持续性曲率，RDS 的半丧命硫度 (LC50) 数量为 1:11.9。
如绘出 3A 下图，我们用作 Luc 报告基因假HIV和 VeroE6 抑制原质完成染病测试者，辨别到 RDS 对该HIV染病不具口服持久消除作用，并且有共约消除硫度确认为 1:230RDS 酒精度 (绘出 3B)。我们还举例来说了 RDS 对 VeroE6 抑制原质已逝力的必要影响，确认了 50% 抑制原质丧生口服为 1:11.8RDS 酒精度。
绘出 3：RDS 对 SARS-CoV-2(Luc) 假HIV和野生型 SARS-CoV-2 HIV的口服持久消除消除作用。用 RDS 整年酒精管控程序 A、BVeroE6 抑制原质，后用 SARS-CoV-2(Luc) 假型HIV染病。将抑制原质洒去HIV和 RDS，并在不持久 RDS 的持续持续性完成培养出来。在染病后 72 天内用荧光伦酶监测HIV染病的消除作用。未染病抑制原质和 SARS-CoV-2-luc 染病但予以过 RDS 放射治疗的抑制原质作为对照。测试者重复使用三次。素描口服自由基曲率和 RDS 的 I-C50 酒精数量为 1:230。CRDS 对 VeroE6 抑制原质的抑制原质危险持续性也通过钴丙啶颜料和流基本型抑制原质忍术表征。用 RDS 整年酒精 4 天内，洒去 RDS，在不包涵 RDS 的持续持续性培养出来 72 天内。素描抑制原质危险持续性口服-自由基曲率，RDS 的半丧命硫度 (LC50) 数量为 1:13.8 酒精。DRDS 消除传染持续性 SARS-CoV-2 染病。用整年酒精的 RDS 管控程序 VeroE6 抑制原质，并在 RDS 持久的持续持续性染病 SARS-CoV-2。染病 48 天内后，通过恶菌斑分析原理HIV释放后的HIV复制消除持续持续性。消除试制一基本型五份完成，并在 Prism7(Graph Pad) 中会用作单向方差 (One-Way ANOVA) 分析原理及 Dunnett 后检验 (Dunnett's Post Test)，借以确认统计资料显着持续性。显著持续性个数用星号表示如下：*p
为了必要持续性证明用作假HIV获得的结果，我们测试者了 RDS 对于 SARS-CoV-2 染病的阻碍传染持续性并能。如绘出 3D 下图，RDS 同时也阻碍了 SARS-CoV-2 对 VeroE6 抑制原质的染病。RDS 在酒精 1:40 以上时可显著减小HIV斑块的呈现出。
综上，通过 SARS-CoV-2 假HIV与传染持续性HIV的得出结论，RDS 内包涵消除 SARS-CoV-2 染病的已逝持续性气态，可能会是通过必要灭已逝HIV或阻碍HIV的后期染病开发进度。
为必要持续性数据分析可能会的机制，我们将传染持续性 SARS-CoV-2 HIV微粒与整年酒精的 RDS 在 37°C 下预培养出来 1 天内。随后，将气态必要持续性依次酒精-(10–1 至 10–4)，并重新加入 Vero 抑制原质完成恶菌斑分析原理以确认HIV染病持续性的增高。如绘出 4A 下图，我们辨别到在 RDS 中会年中沾染一天内后的HIV微粒，其 SARS-CoV-2 的染病效价也长方形口服持久下降。该得出结论了 RDS 可有效率必要灭已逝 SARS-CoV-2 HIV微粒的传染持续性。
我们必要持续性测试者了 RDS 是否也能消除 SARS-CoV-2 HIV变种的染病。为此，我们利用近来开发的混合的大HIV-SARS-CoV-2 假型HIV (Ha-CoV-2)[31] 来合成一系列 S 抑制原值得注意，除此以外荷兰值得注意 (B.1.1.7)，喀麦隆值得注意 (B.1.351)，巴西值得注意 (P.1)，加州值得注意 (B.1.429)，和其他几个新兴值得注意 (B.1.2，B.1.494，B.1.1.207B.1.258，B.1.1.298)。Ha-CoV-2(Luc) 和方面 S 抑制原生物体体在 37°C 整年酒精 RDS 培养出来 1 天内。随后，用该气态染病 HEK293T(ACE2/TMPRESS2) 靶抑制原质。染病后 12 天内，荧光伦酶量度HIV染病的消除作用。如绘出 4B 下图，我们还辨别到了 RDS 对 Ha-CoV-2(Luc) 和所有 S 抑制原值得注意的口服持久消除。
我们还测试者了 RDS 阻碍 SARS-CoV 染病的并能，用作带有 SARS-CoV 突刺抑制原的 GFP 报导基因比较慢HIV和[15] 实为口服。我们将人 A549(ACE2) 抑制原质用作靶抑制原质，将其用系列酒精的 RDS 管控程序，然后用 SARS-CoV(GFP) 报告基因假HIV染病 4-6 天内。染病后在不包涵 RDS 的持续持续性培养出来抑制原质，流基本型抑制原质忍术举例来说监测其对HIV染病的消除作用。同样，用作钴丙啶排除自始在丧生与已丧生的抑制原质，仅在已逝抑制原质群中会分析原理 GFP+抑制原质。如绘出 5A 下图，我们辨别到 RDS 对 SARS-CoV(GFP) 假型HIV的消除作用长方形口服持久。我们必要持续性表明了这些结果，并举例来说了 RDS 细胞内的消除与 Luc 报导基因 SARS-CoV 假型HIV，SARSCoV(Luc)。我们辨别到 RDS 对 SARS-CoV(Luc) 和的消除作用长方形口服持续性依赖，其半消除硫度 (IC50) 为 1:70.88 酒精度 (绘出 5B，C)。考虑到 SARS-CoV 和 SARS-CoV-2 都用作 ACE2 染病靶抑制原质，我们还测试者了 RDS 的抑制HIV已逝持续性是否仅针对与 ACE2 有相互作用的冠状HIV。为此，我们监测了一种不方面的负链 RNA HIV--乙型肺炎HIV。它通过HIV血凝伦 (HA) 和抑制原质α-唾液硫来染病靶抑制原质。为了合成乙型肺炎HIV，将表达出来乙型肺炎 A/WSN/33(H1N1) 基因组每个片段的 8 个表征和一个 GFP-报导基因共转染到 HEK293T 抑制原质中会。在 RDS 持久的持续持续性，利用HIV微粒后用于染病目标 MDCK 抑制原质。如绘出 6A 下图，我们辨别到 RDS 对乙型肺炎HIV的消除作用长方形口服持久。RDS 在 1:40 和 1:80 酒精时可几乎阻碍HIV染病，在 1:160 酒精时则可部分消除乙型肺炎。RDS 对 MDCK 抑制原质的半丧命硫度 (LC50) 经量度为 1:18.5(绘出 6B)。这些得出结论，RDS 的抑制HIV已逝持续性并非针对特定HIV，而可能会并能普遍消除多种细菌感染HIV，如冠状HIV和乙型肺炎HIV。
▋研讨
在本报告中会，我们归功于习惯药剂融肺毒口服液 (RDS) 内包涵广谱抑制HIV已逝持续性，可阻碍 SARS-CoV、SARSCoV-2 和乙型肺炎HIV的染病。虽然 RDS 并能消除多种HIV，但其抑制HIV已逝持续性因HIV类型和致病而异。例如，对 SARS-CoV 比较慢假HIV的 I-C50 硫度为 1:7.9 酒精度，对 SARS-CoV-2 比较慢假HIV的 I-C50 硫度为 1:230 酒精度。对于传染持续性野生型 SARS-CoV-2 HIV，I-C50 为 1:40 酒精度，对乙型肺炎，其 I-C50 为 1:250。RDS 对 Ha-CoV-2 及其变种有各不相同的消除作用，IC50 数个数从 1:70 到 1:2601 酒精度不等 (绘出 4B)。
(见下一页绘出)
绘出 4 RDS 对 SARS-CoV-2 和派生的 Ha-CoV-2 变种不具口服持久灭已逝作用。ASARS-CoV-2 微粒加整年酒精的 RDS 在 37°C 下培养出来 1 天内。随后，将气态必要持续性整年酒精，并重新加入 Vero 抑制原质中会完成恶菌斑分析原理，以确认HIV染病持续性增高。消除试制一基本型五份完成，并在 Prism7(GraphPad) 中会用作单向方差 (One-WayANOVA) 分析原理和 Dunnett 后检验 (Dunnett'sPostTest) 借以确认统计资料显着持续性。显著持续性个数用星号表示如下：*p
BHa-CoV-2(Luc) 和方面 S 抑制原值得注意与整年酒精的 RDS 在 37°C 培养出来 1 天内后，用气态染病 HEK293T(ACE2/TMPRESS2) 靶抑制原质。染病后 12 天内，荧光伦酶量度HIV染病的消除作用。RDS 的 IC50 个数的酒精度为 1:177(wt)，1:828(B.1.1.7)，1:124(B.1.351)，1:88(P.1)，1:134(B.1.1.207)，1:2601(B.1.1.298)，1:70(B.1.258)，1:362(B.1.429)，1:163(B.1.494)，1:137(B.1.2)。
我们必要持续性归功于 RDS 可以消除冠状HIV的后期染病开发进度。虽然具体的抑制HIV机制尚未清楚，但 RDS 可以通过必要灭已逝HIV微粒或通过制止HIV渗透或阻碍HIV渗透后的后期开发进度来制止HIV染病。在其他几种习惯中会药中会也发掘出了抑制 SARS-CoV 和 SARS-CoV-2 的已逝持续性。例如，一种常见的习惯中会药——甘草。
甘草根中会已证明内包涵甘草硫伦，可消除 SARS HIV[32] 诊疗分开株的复制。此外，另一种可用于放射治疗细菌感染哮喘的中会药——双黄连制剂，已看出出在排泄以口服持久方基本型消除 SARS-CoV-23CL 抑制原酶 (3CLpro) 已逝持续性。玄参衍生物和玄参伦拟作为双黄连阻碍 3CLpro[33] 的有效率气态。
绘出 5 RDS 消除 SARS-CoV 假型HIV对 A549(ACE2) 抑制原质的染病。用整年酒精的 RDS 管控程序 A、B 抑制原质，用 SARS-CoV(GFP)(A) 或 SARSCoV(Luc)B 假型HIV染病。将抑制原质清洒，去掉HIV和 RDS，在不持久 RDS 的持续持续性完成培养出来。在染病后 48 天内和 72 天内，通过流基本型抑制原质忍术或荧光伦酶监测来表征HIV染病的消除作用。测试者重复使用三次。素描口服响应曲率，并素描 RDS 的 IC50 个数为 1:70.9 酒精度 (C)
绘出 6 RDS 消除的大流HIV对 MDCK 抑制原质的染病。(A) 用整年酒精的 RDS 管控程序 MDCK 抑制原质 30 分钟，然后用的大流HIV (GFP) 对其完成染病。染病后，在 RDS 持久下培养出来抑制原质。36 天内后用流基本型抑制原质仪对HIV染病的消除作用完成表征。把未染病的抑制原质与被的大流HIV (GFP) 染病但予以 RDS 管控的抑制原质完成对比。绘出中会看出了 GFP+抑制原质的倍数。PI 表示钴丙啶 PI。
(B) 另外还用作了 MTT 量度法表征了 RDS 对 MDCK 抑制原质的危险持续性，素描了抑制原质危险持续性的口服-自由基曲率，经计算，RDS 的有共约丧命硫度为 1:18.5 酒精度 RDS 的有效率抑制HIV气态尚未确认。然而，RDS 各不相同于玄参衍生物和玄参伦，RDS 可以通过必要灭已逝HIV基本粒子来阻碍HIV染病 (绘出 4)，而玄参衍生物和玄参伦则在HIV生命周期的后期通过阻碍HIV抑制原酶的已逝持续性来持久。然而，RDS 的排泄抑制 SARS-CoV-2 已逝持续性仍需在今后的鸟类数据分析和有机体乳腺癌中会得不到表明。以外，我们自始在完成小型鸟类测试者，以确认 RDS 在体内阻碍 SARS-CoV-2 HIV染病的潜能。
▋论据
我们的数据分析表明，RDS 可普遍消除细菌感染HIV的染病，如 SARS-CoV、SARS-CoV-2 和乙型肺炎。
▋原理
抑制原质和抑制原质培养出来
HEK293T (ATCC 阿曼迪亚，弗吉尼亚) MDCK (ATCC 阿曼迪亚，弗吉尼亚)，VeroE6 (ATCC 阿曼迪亚，弗吉尼亚) 和 A549 (ACE2) (来自 Virongy LLC 获赠，阿曼迪亚，弗吉尼亚)，和 HEK293T (ACE2/TMPRESS2) (来自 Virongy LLC 获赠，阿曼迪亚，弗吉尼亚) 以外保存于 Dulbecco's modifiedEagle's medium (DMEM) (赛默飞世尔新能源 Thermo Fisher Scientific) 内包涵 10% 热灭已逝 FBS 和 1×阿司匹林-链霉伦 (赛默飞世尔新能源 Thermo Fisher Scientific)。在 HEK293T (ACE2/TMPRESS2) 抑制原质培养出来基中会分别以 1μg/ml 和 200μg/ml 的硫度重新加入嘌呤霉伦和潮霉伦 B。
真核生物转染和HIV合成
包涵 SARS-CoVS 抑制原或 SARS-CoV-2S 抑制原的比较慢持续性假型HIV微粒由 Virongy LLC (Manassas，VA) 包括，或按照上面描述的原理[15] 合成。简言之，为了合成 GFP 报导基因比较慢持续性假HIV，HEK293T 抑制原质与表达出来 SARS-CoVS 抑制原或 SARS-CoV-2S 抑制原的表征、pCMVΔR8.2 和 pLKO.1-puro-TurboGFP 共转染。为了产出荧光伦酶报导基因比较慢持续性假型HIV，将 HEK293T 抑制原质与表达出来 SARSCoVS 抑制原或 SARS-CoV-2S 抑制原的表征、pCMVΔR8.2 和 pLTR-Tat-IRES-Luc 完成共转染。转染后 48 天内利用HIV上清液，离心浓缩，−80℃ 保存。野生型 SARS-CoV-2 HIV (Isolate USA-WA1/2020) 由 BEI Bioresources (Manassas，VA) 包括。pHW-NAGFP (ΔAT6) 报告基因真核生物和 A/WSN/1933 H1N1 派生真核生物 pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-HA、pHW2000-NP、pHW2000-NA、pHW20000M 由 FengLi 指导教授友好包括。在肺炎HIV A-GFP 报导基因基本粒子合成中会，将 pHW2000-pb2、pHW2000-pb1、pHW2000-PA、pHW2000-ha、pHW2000-np、pHW2000-na、pHW2000-m、pHW2000-ns 和 pHW-NA-GFP 共转染 HEK293T 抑制原质 (ΔAT6)。48 天内后利用HIV上清液。SARS-CoV-2S、M、E、N 表达出来表征转售 Sinobiological。利用 Twist Bioscience 合成了 Ha-CoV-2(Luc) 表征和 S 抑制原生物体表征。Ha-CoV-2(Luc) 和 S 抑制原生物体基本粒子按照上面描述原理[31] 完成合成。
HIV染病和药剂消除试制
RDS(融肺毒口服液)(来自 Dejia Harmony 获赠，利斯堡，弗吉尼亚) 是由马指导教授测试者室 (Burnaby，BC，Canada) 制造的一种金融业产品。RDS 中会所有中会泡茶气态以外适用《中会国药典 2015 年版》「饮片」标准，除此以外有效率气态包涵量及重金属、农药Edition监测。RDS 是一种中会药的共煎剂，事与愿违产物在真空状况下蒸发。SARS-CoV-2 抑制血清由 LanceA. Liotta 外科医生包括。将科莫朵尔盐硫盐 (Sigma) 重新悬浮在苯酚 (Sigma) 中会。对于假型HIV染病，12 孔板中会的 A549(ACE2) 抑制原质 (来自 Virongy LLC 获赠，阿曼迪亚，弗吉尼亚) 或 VeroE6 抑制原质用 RDS 管控程序 30 分钟，在 37℃ 下染病 4-6 天内，然后在蜜糖培养出来基中会洒涤培养出来 48-72 天内。对于 VeroE6 抑制原质的染病，抑制原质也被 CoV-2 假型HIV染病増强剂 (CoV-2PIE) (来自 Virongy LLC 获赠，阿曼迪亚，弗吉尼亚) 管控程序后，在 37°C 下再管控 30 分钟。用作 GloMaxDiscover 酶标仪 (Promega) 分析原理抑制原质裂解物的荧光伦酶已逝持续性。对于野生型 SARS-CoV-2 染病，VeroE6 抑制原质在 37°C 下用 RDS 管控程序 30 分钟，然后用 MOI 为 0.05 染病 SARS-CoV-2 (Isolate USA-WA1/2020；BEI Bioresources) 在弗雷德里克米切尔该大学的 BSL-3 收容体育场馆内滞留 1 天内。抑制原质用 PBS 洒涤 2 次，用包涵 RDS 的培养出来基培养出来 48 天内。从上清中会提取HIV，用 12 孔板培养出来的 Vero 抑制原质单层中会的恶菌斑试制量度小瓶滴度。简言之，每个材料在完整的 Dul-becco's ModifiedEagle 培养出来基 (VWR) 中会合成，还除此以外 1X 阿司匹林-链霉伦 (VWR)，并附加 10% 的 FBS(赛默飞世尔新能源 Thermo Fisher Scientific)。然后将 200 微升的每种酒精液吸附到 VeroE6 抑制原质单层的三个平行孔上 1 天内。然后用 1～2 ml0.6% 琼脂糖 (Invitrogen) 和一部分完整的 Eagle Minimal Essential 培养出来基 (VWR) 的气态遮盖单层，包涵 1X 阿司匹林-链霉伦，并附加 10%FBS。48 天内后，将单层薄膜固定在 10% 的大醛气态中会 1 天内，并去除遮盖的琼脂塞。为了颜料斑块，重新加入内包涵 20% 甘油的 1% 结晶紫颜料气态 5 分钟，然后用去离子水洒涤。对于乙型肺炎HIV染病 MDCK 抑制原质，在 37°C 下用 RDS 管控程序 30 分钟，然后用 A-GFP 报导基因HIV染病 6 天内。用包涵 RDS 的培养出来基洒涤抑制原质，培养出来 36 天内。GFP 表达出来通过流基本型抑制原质仪表征。(FACSCalibur，BD Biosciences).
对于 SARS-CoV-2 HIV微粒的 RDS 灭已逝试制，将 100μl 整年酒精的 RDS 附加到 1 mlSARS-CoV-2 HIV原液 (3.65×105PFU/ml) 中会，事与愿违 RDS 酒精为 1:20，1:40 或 1:80。也除此以外对照状况 (1 ml HIV+100μl 培养出来基)。气态在 37°C 下培养出来 1 天内。随后，对气态完成系列酒精以产生额外的 1:10、1:100、1:1,000 和 1:10,000 酒精度，并将整年酒精的材料重新加入 12 孔板中会的 Vero 抑制原质中会，用于完成恶菌斑量度分析原理。斑块量度中会事与愿违的 RDS 酒精度为 1:200 至 1:200,000；1:400 到 1:400,000；和 1:800 到 1:800,000 的 RDS 酒精液。
Ha-CoV-2(Luc) 和 S 抑制原生物体基本粒子按照上面描述的原理[31] 合成。对于 Ha-CoV-2(Luc) 的 RDS 灭已逝，将 5μl 整年酒精的 RDS 附加到 45μlHa-CoV-2(Luc) 或值得注意中会，事与愿违 RDS 酒精度为 1:20、1:40、1:80、1:160 或 1:320。将气态在 37°C 下培养出来 1 天内，然后在 RDS 持久下染病 HEK293T (ACE2/TMPRESS2) 抑制原质 12 天内。用作 GloMax Discover 酶标仪 (Promega) 分析原理抑制原质裂解物的荧光伦酶已逝持续性。
抑制原质危险持续性分析原理监测
用钴丙啶颜料和流基本型抑制原质忍术举例来说对 A549 (ACE2) 抑制原质和 VeroE6 抑制原质的药剂抑制原质危险持续性完成监测，如所述 (34)。用作抑制原质増殖试剂盒 I(MTT) (Sigma) 和大厂敦促的解决方案对 MDCK 抑制原质的药剂危险持续性完成举例来说。简言之，将 MDCK 抑制原质 (ATCC) 以每孔 1×-105 个抑制原质的自由基速度接种到 12 孔板中会。抑制原质培养出来隔夜后，通过 RDS 管控 1 天，然后在 MTT 记号试剂 (Sigma) 的培养出来基中会培养出来。将抑制原质与记号试剂协同培养出来 4 天内，再后续重新加入 MTT 増气态。培养出来皿孵育半夜，用 GloMax Discover 酶标仪 (Promega) 量度吸光度。
缩写
SARS-CoV：相当严重急持续性肺脏综合症方面冠状HIV；SARSCoV-2：Severe 相当严重急持续性肺脏综合症方面冠状HIV-2；TCM：习惯中会药；RDS：细菌感染瘦身口服液；Ha-CoV-2：混合乙型新冠HIV假HIV。
祝贺
深受感动 FengLi 包括肺炎HIV表达出来表征，深受感动 LanceLiotta 包括抑制毒血清；深受感动 TedCi，HeSun，ZhigangGao，WanyingWu 的研讨与敦促；深受感动 KevinCarter、MarkMamdar、RichKeurajian、KarenFreidouni 包括 RDS 和泡茶提取物。
笔记建树
此次测试者由 Y.W.，R.H. 和 L.A.H. 设计，由 Y.W. 撰稿，由 L.A.H. 编者。B.H.，D.Y.，A.A.O.，L.D.C.，S.H.，D.D、GA 及 YM 执行了该测试者。所有笔记已阅读并批准事与愿违稿件。
资金
本数据分析的经费来自于弗雷德里克米切尔该大学外部拨款 223741(DeJiaHarmony/Anti-SARS-CoV-2)，该保证金由德佳和畅 (DeJiaHarmony) 包括。
数据和金属材料的完整持续性
本数据分析中会产生或分析原理的所有数据以外还除此以外在本文中会。试剂可从 Y.W 处利用。
表示遗憾
批准及参与同意
不一般来说
同意出版
不一般来说
竞争金融业利益
弗雷德里克米切尔该大学各地区生物防御和哮喘中会心的 RMH 和 YW 已获得了德佳和畅 (DejiaHarmony) 的数据分析支助，LAH 为德佳和畅任职高级顾问并获得了赔偿金。没有其他关系或户外已逝动可能会会必要影响到提交的实习。
笔记详细信息
1英美两国弗吉尼亚弗雷德里克米切尔该大学系统生物学所大学各地区生物防御和哮喘中会心，阿曼迪亚 20110。
2VirongyLLC，弗吉尼亚阿曼迪亚。3加拿大伯纳比，BCV5J0E5 马指导教授测试者室 (Dr.Ma's LaboratoriesInc.)。4 英美两国弗吉尼亚利斯堡世界卫生科学研究组织，20176。
收稿日期：2021 年 4 同年 7 日
接受日期：2021 年 5 同年 10 日
线上出版时间：2021 年 5 同年 29 日
参考文献
1. Zhu N, Zhang D, Wang W, Li X, Yang B, Song J, et al. A Novel Coronirus from Patients with Pneumonia in China, 2019. N Engl J Med. 2020;382(8):727–33.
2. Wu Y, Ho W, Huang Y, Jin D, Li S, Liu S, et al. SARS-CoV-2 is an appropriate name for the new coronirus. Lancet. 2020;395(10228):949–50.
3. Gorbalenya AE, Baker SC, Baric RS, de Groot RJ, Drosten C, Gulyaeva AA, et al. Coroniridae Study Group of the International Committee on Taxonomy of Viruses. Nat Microbiol. 2020;5:536–44.
4. Drosten C, Günther S, Preiser W, van der Werf S, Brodt H-R, Becker S, et al. Identification of a novel coronirus in patients with severe acute respiratory syndrome. N Engl J Med. 2003;348(20):1967–76.
5. Ksiazek TG, Erdman D, Goldsmith CS, Zaki SR, Peret T, Emery S, et al. A novel coronirus associated with severe acute respiratory syndrome. N Engl J Med. 2003;348(20):1953–66.
6. Peiris JSM, Lai ST, Poon LLM, Guan Y, Yam LYC, Lim W, et al. Coronirus as a possible cause of severe acute respiratory syndrome. Lancet. 2003;361(9366):1319–25.
7. Zhou P, Yang X-L, Wang X-G, Hu B, Zhang L, Zhang W, et al. A pneumonia outbreak associated with a new coronirus of probable bat origin. Nature. 2020;579(7798):270–3.
8. Wu F, Zhao S, Yu B, Chen Y-M, Wang W, Song Z-G, et al. A new coronirus associated with human respiratory disease in China. Nature. 2020;579(7798):265–9.
9. Yang Y, Islam MS, Wang J, Li Y, Chen X. Traditional Chinese medicine in the treatment of patients infected with 2019-new coronirus (SARS-CoV-2): a review and perspective. Int J Biol Sci. 2020;16(10):1708–17.
10. Ling CQ. Traditional Chinese medicine is a resource for drug discovery against 2019 novel coronirus (SARS-CoV-2). Journal Integr Medicine. 2020;18(2):87–8.
11. Shan M-Q, Qian Y, Yu S, Guo S-C, Zhang L, Ding A-W, et al. Anti-inflammatory effect of volatile oil from Schizonepeta tenuifolia on carrageenininduced pleurisy in rats and its application to study of appropriate harvesting time coupled with multi-attribute comprehensive index method. J Ethnopharmacol. 2016;194:580–6.
12. Jung ID, Kim HY, Park JW, Lee CM, Noh KT, Kang HK, et al. RG-II from Panax ginseng C.A. Meyer suppresses asthmatic reaction. BMB Reports. 2012;45(2):79–84.
13. Wu W, Li R, Li X, He J, Jiang S, Liu S, et al. Quercetin as an antiviral agent inhibits influenza A virus (IAV) entry. Viruses. 2015;8(1):6. doi. org/
10. 3390/ v8010 006. 14. Belouzard S, Chu VC, Whittaker GR. Activation of the SARS coronirus spike protein via sequential proteolytic cleage at two distinct sites. Proc Natl Acad Sci USA. 2009;106(14):5871–6.
15. He S, Waheed AA, Hetrick B, Dabbagh D, Akhrymuk IV, Kehn-Hall K, et al. PSGL-1 inhibits the incorporation of SARS-CoV and SARS-CoV-2 spike glycoproteins into pseudovirus and impairs pseudovirus attachment and infectivity. Viruses. 2021;13(1):46. doi. org/ 10. 3390/ v1301 0046.
16. Boriskin YS, Leneva IA, Pecheur EI, Polyak SJ. Arbidol: a broad-spectrum antiviral compound that blocks viral fusion. Curr Med Chem. 2008;15(10):997–1005.
17. Kakuda R, Imai M, Yaoita Y, Machida K, Kikuchi M. Secoiridoid glycosides from the flower buds of Lonicera japonica. Phytochemistry. 2000;55(8):879–81.
18. Son KH, Jung KY, Chang HW, Kim HP, Kang SS. Triterpenoid saponins from the aerial parts of Lonicera japonica. Phytochemistry. 1994;35(4):1005–8.
19. Kwak WJ, Han CK, Chang HW, Kim HP, Kang SS, Son KH. Loniceroside C, an antiinflammatory saponin from Lonicera japonica. Chem Pharm Bull. 2003;51(3):333–5.
20. Din LB, Bedgar DL, Katayama T, Lewis NG. On the stereoselective synthesis of (+)-pinoresinol in Forsythia suspensa from its achiral precursor, coniferyl alcohol. Phytochemistry. 1992;31(11):3869–74.
21. Kim YS, Woo JY, Han CK, Chang IM. Safety ysis of panax ginseng in randomized clinical trials: a systematic review. Medicines. 2015;2(2):106–26.
22. Attele AS, Wu JA, Yuan CS. Ginseng pharmacology: multiple constituents and multiple actions. Biochem Pharmacol. 1999;58(11):1685–93.
23. Yu S, Chen Y, Zhang L, Shan M, Tang Y, Ding A. Quantitative comparative ysis of the bio-active and toxic constituents of lees and spikes of Schizonepeta tenuifolia at different harvesting times. Int J Mol Sci. 2011;12(10):6635–44.
24. Ren D, Shen Z-y, Qin L-p, Zhu B. Pharmacology, phytochemistry, and traditional uses of Scrophularia ningpoensis Hemsl. J Ethnopharmacol. 2021;269:113688.
25. Sefer F, Misirli A, Gülcan R, editors. A RESEARCH ON PHENOLIC AND CYANOGENIC COMPOUNDS IN SWEET AND BITTER KERNELLED APRICOT VARIETIES. 2006: International Society for Horticultural Science (ISHS), Leuven, Belgium.
26. Chong W, Feng XY, Zhen GZ, Dan L, Yue D. Inhibition of mast cell degranulation by saponins from Gleditsia sinensis–structure-activity relationships. Nat Prod Commun. 2009;4(6):777–82.
27. Li WH, Zhang XM, Tian RR, Zheng YT, Zhao WM, Qiu MH. A new anti-HIV lupane acid from Gleditsia sinensis Lam. J Asian Nat Prod Res. 2007;9(6–8):551–5.
28. Nazari S, Rameshrad M, Hosseinzadeh H. Toxicological effects of Glycyrrhiza glabra (Licorice): a review. Phytother Res. 2017;31(11):1635–50.
29. Meltzer B, Dabbagh D, Guo J, Kashanchi F, Tyagi M, Wu Y. Tat controls transcriptional persistence of unintegrated HIV genome in primary human macrophages. Virology. 2018;518:241–52.
30. Wang Z, Tang Z, Zheng Y, Yu D, Spear M, Iyer SR, et al. Development of a nonintegrating Rev-dependent lentiviral vector carrying diphtheria toxin A chain and human TRAF6 to target HIV reservoirs. Gene Ther. 2010;17(9):1063–76.
31. Hetrick B, He S, Chilin LD, Dabbagh D, Alem F, Narayanan A, et al. Development of a novel hybrid alphirus-SARS-CoV-2 particle for rapid in vitro screening and quantification of neutralization antibodies, viral variants, and antiviral drugs. bioRxiv 2020. doi. org/ 10. 1101/ 2020. 12. 22. 423965.
32. Cinatl J, Morgenstern B, Bauer G, Chandra P, Rabenau H, Doerr HW. Glycyrrhizin, an active component of liquorice roots, and replication of SARS-associated coronirus. Lancet. 2003;361(9374):2045–6.
33. Su H-x, Yao S, Zhao W-f, Li M-j, Liu J, Shang W-j, et al. Anti-SARS-CoV-2 activities in vitro of Shuanghuanglian preparations and bioactive ingredients. Acta Pharmacologica Sinica. 2020;41(9):1167–77.
34. Crowley LC, Scott AP, Marfell BJ, Boughaba JA, Chojnowski G, Waterhouse NJ. Measuring cell death by Propidium Iodide uptake and flow cytometry. Cold Spring Harb Protoc. 2016. doi. org/ 10. 1101/ pdb. prot0 87163.
编者： 翟超男相关新闻
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